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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類：PCR相關(guān)
儲(chǔ)存條件：—20℃,36個(gè)月
用途：耐熱Taq DNA聚合酶
注意事項(xiàng)：附送10x PCR buffer,Taq DNA Polymerase是從克隆有Thermusaquaticus DNA Polymerase基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過柱純化分離出來(lái)的重組蛋白,其分子量為94 KD。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和5’→3’核酸外切酶活性,無(wú)3’→5’核酸外切酶活性。在PCR反應(yīng)中,該酶的延伸速度為1-2kb/分鐘,PCR產(chǎn)物3’端帶A,可直接用于T/A載體克隆。該酶無(wú)外源核酸酶和細(xì)菌基因組DNA?
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Taq DNA Polymerase | 500U | FS-R7417 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定：
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4） 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
球芽孢桿菌谷受體2C抗體（N端）Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit堿性成纖維生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)
彎孢菌癌/抗原58抗體Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)
解淀粉芽孢桿菌霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白3抗體Human LIF(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit間皮(MSLN)
灰黃青霉增殖相關(guān)核仁抗原抗體Human PDGFA(Plaet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit間變性淋巴瘤激(ALK)
云南假諾氏菌NALP12抗體Human ABCG1(ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit間α-抑制因子重鏈H1(ITIH1)
琥珀乳牛肝菌富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體Human ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit間-alpha-抑制劑重鏈H4(ITIH4/IHRP/ITIHL1/PK120/PRO1851)
細(xì)囊殼富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Human ACC(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit甲狀腺抗體(TAb)
微小鏈霉菌富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體Human B2M(Beta2-microglobulin) ELISA Kit甲狀腺(T4)
季也蒙假絲酵母富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體Human MUC-1(Mucin-1) ELISA Kit甲狀腺球蛋白(TG)
球毛殼菌（可訂購(gòu)）鈉鈣交換蛋白2抗體Human ACAT2(Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit甲狀腺抗體(TAb)
煙色小菌核鏈霉菌抑癌基因NDRG2抗體Human IGFBP-5(Insulin-like growth factor-binding protein 5) ELISA Kit甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)
孟氏假單胞菌DNA損傷關(guān)蛋白1抗體Human sRAGE(Solube Receptor for Advanced Glycation End product) ELISA Kit甲狀腺激受體β(THRb)
假單胞菌伴肌動(dòng)蛋白抗體Human CALM1(Calmodulin) ELISA Kit甲狀腺過氧化物(TPO)
草木樨中華根瘤菌抑癌基因NDRG4抗體Human GFAP(Glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit甲狀腺肽激抗體(THAA)
綠僵菌NK受體2A抗體Human IgA(Immunoglobulin A) ELISA Kit甲狀腺激免疫球蛋白(TSI)
芹側(cè)耳（杏鮑菇）一氧化氮合成-2抗體（誘導(dǎo)型）Human IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit甲狀旁腺激樣蛋白(PLP)
黃海芽孢桿菌Bacillus│marisflavi 質(zhì)量規(guī)格：20000U/g,BR黃芪總皂苷
陰溝腸桿菌Enterobacter│cloacae 質(zhì)量規(guī)格：BR,6萬(wàn)U/G葛根
茯苓Poria│cocos 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR,M.W:80萬(wàn)-150萬(wàn)鬼臼
Taq DNA PolymeraseF II (Mouse coagulation factor II ) ELISA Kit 小鼠Ⅱ規(guī)格： 48T
ET(Mouse endotoxin) ELISA Kit 小鼠內(nèi)毒su規(guī)格： 48T
ANP(Mouse Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 小鼠心鈉肽規(guī)格： 48T
PPAR- Gamma(Mouse Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit 小鼠過氧化物mei體增殖因子活化受體γ規(guī)格： 48T
TSST-1(Mouse toxic shock syndrome toxin) ELISA Kit 小鼠毒性休克綜合征毒su1規(guī)格： 48T
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