化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
產(chǎn)品分類：酶抑制劑
儲存條件：—20℃,避光,12個月
用途：蛋白酶抑制劑
注意事項：主要由亮抑酶肽、胰凝乳蛋白酶抑制劑、抑胃肽酶A、PMSF等組成。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
蛋白酶抑制劑混合液 | 1ml | FS-R7515 |
配制與標定的實驗原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。
實驗方法與判定：
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。
1） 第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1） 轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
松口蘑衰老標記蛋白30抗體Anti-Cytochrome P450 1A2/Cyp1a2 Antibody著絲粒蛋白E(CENPE)
枯草芽胞桿菌環(huán)指蛋白56Anti-DAPK1 Antibody著絲粒蛋白B(CENPB)
膜醭畢赤酵母受體活性修飾蛋白1抗體Anti-CYP7A1 Antibody著絲粒蛋白36(CENP36)
黑乳菇胞內接頭蛋白P14抗體Anti-Cyt 19/As3mt Antibody著絲粒蛋白32(CENP32)
約氏不動桿菌RNA結合蛋白X-連鎖蛋白2抗體Anti-DAPK2 Antibody蔗糖異麥芽糖(SI)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型視網(wǎng)膜母瘤相關蛋白p130抗體Anti-DAXX Antibody遮蔽蛋白(OBSCN)
折疊馬賽菌磷化A-Raf抗體Anti-DAXX Antibody張力蛋白3(TNS3)
大腸埃希氏菌環(huán)指蛋白10抗體Anti-DAXX Antibody張力蛋白2(TNS2)
藍色犁頭霉RAN結合蛋白2/核孔蛋白抗體Anti-DARS2 Antibody張力蛋白1(TNS1)
聚貪噬菌環(huán)指蛋白11抗體Anti-DAZAP1 Antibody粘脂蛋白3(MCOLN3)
蘇云金芽孢桿菌性核糖體磷蛋白P2抗體Anti-DBI Antibody粘脂蛋白2(MCOLN2)
彈性馬鞍菌腫瘤相關表面抗原RCAS1抗體Anti-DBF4 Antibody粘脂蛋白1(MCOLN1)
植物乳桿菌植物亞種心肌蘭堿受體抗體（腦肌蘭堿受體）Anti-DAZL Antibody粘著斑激(FAK)
松鼠葡萄球菌松鼠亞種RASSF5抗體Anti-DBP Antibody粘膜關聯(lián)上皮趨化因子(MEC)
蒼白桿菌環(huán)指蛋白93抗體Anti-DBH Antibody粘蛋白7(MUC7)
喜熱單胞菌屬環(huán)指蛋白111抗體Anti-DCC Antibody粘蛋白6(MUC6)
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質量規(guī)格：>90%(T),BR
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質量規(guī)格：0.98
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Burkholderia│gladioli 質量規(guī)格：BR
蛋白酶抑制劑混合液ARIP2B/FITC 熒光su標記激活su受體2B/激活su受體相互作用蛋白2bIgG規(guī)格： 0.2ml
Aromatase P450/FITC 熒光su標記芳香化mei蛋白IgG規(guī)格： 0.2ml
Aromatase P450/FITC 熒光su標記芳香化mei/細胞色suP450/P450IgG規(guī)格： 0.2ml
ART/FITC 熒光su標記膠質細胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF的一種IgG規(guī)格： 0.2ml
ASCL1/MASH1 /FITC 熒光su標記神經(jīng)母細胞特異性轉移因子IgG規(guī)格： 0.2ml
化工儀器網(wǎng)