鉬酸銨負(fù)染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：綿羊核孔蛋白35kda(NUP35)試劑盒Anti-GRK1 Antibody豬胰島素
綿羊煙酰腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶5(NOX5)試劑盒Anti-GRM4 Antibody間粘附分子-2抗原
綿羊T急性母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)試劑盒Anti-GRK7 Antibody白介素1α/IL-1α
綿羊胰蛋白酶原II(Try2)試劑盒 Anti-

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產(chǎn)品分類：染色其他

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：負(fù)染色又稱陰性染色,是相對(duì)于普通染色(稱正染色)而言。主要用于電子顯微鏡技術(shù)中的染色。

注意事項(xiàng)：染色后的樣品圖像呈現(xiàn)透明的亮光,而背景圖像呈黑色。pH值為6.8-7.0之間。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌磷化Disabled 1抗體Human SON (Protein SON) ELISA KIT人白介17B(IL17B)免疫試劑盒

杜搟氏菌雙皮質(zhì)抗體Human GPA33(Cell surface A33 antigen) ELISA Kit人白介17A(IL-17A)免疫試劑盒

豌豆根瘤菌D酪激衰減蛋白2抗體Human ATM(Serine-protein kinase ATM) ELISA Kit人白介16(IL-16)免疫試劑盒

淡紫灰鏈霉菌磷化D酪激衰減蛋白2抗體Human SORT1(Sortilin) ELISA Kit人白介15(IL-15)免疫試劑盒

田菁根瘤菌*磷化D酪激衰減蛋白2抗體Human CAPN15 (Calpain-15) ELISA KIT人白介13(IL-13)免疫試劑盒

哈茨木霉磷化D酪激衰減蛋白2抗體Human HCN4(Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4) ELISA Kit人白介12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌枯草亞種膀胱癌缺失基因1Human SERBP1 (Plasminogen activator inhibitor 1 RNA-binding protein) ELISA KIT人白介-12受體(IL-12R)免疫試劑盒

糙孢籃狀菌磷化膀胱癌缺失基因1抗體Human SIGIRR (Single Ig IL-1-related receptor) ELISA KIT人白介12(IL-12/P70)免疫試劑盒

澳型核果褐腐病菌多巴受體D4抗體Human NIM1K (Serine/threonine-protein kinase NIM1) ELISA KIT人白介12(IL-12/P40)免疫試劑盒

澳大亞平臍蠕孢橋粒斑蛋白1抗體Human NEMF (Nuclear export mediator factor NEMF) ELISA KIT人白介11(IL-11)免疫試劑盒

根霉屬橋粒斑蛋白2抗體Human SSBP2 (Single-stranded DNA-binding protein 2) ELISA KIT人白介10(IL-10)免疫試劑盒

黃曲霉多巴受體D5抗體Human SFT2D1 (Vesicle transport protein SFT2A) ELISA KIT人白喉抗體(Diphtheria Ab)免疫試劑盒

屎腸球菌脫氧三磷核苷水解抗體Human PGAM5 (Serine/threonine-protein phosphatase PGAM5, mitochondrial) ELISA KIT人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)免疫試劑盒

德氏乳桿菌德氏亞種多巴受體D3抗體Human HCN4(Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4) ELISA Kit人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌誘捕受體3抗體Human ATM(Serine-protein kinase ATM) ELISA Kit人艾柯病IgM(ECHO IgM)免疫試劑盒

釀酒酵母多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT抗體Human SMURF2(E3 ubiquitin-protein ligase SMURF2) ELISA Kit人艾柯病IgG(ECHO IgG)免疫試劑盒

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCl德爾塔林

大麗花輪枝孢（棉花黃萎病菌）Verticillium│dahliae 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑:1.0Mol/L HNO3硬飛燕草堿

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體:10%HCL去芹糖桔梗皂苷D
鉬酸銨負(fù)染色液SP1/PS Beta1-G(Human Pregnancy Specific Beta1Glycoprotein) ELISA Kit  人特異性β1糖蛋白規(guī)格： 48T

PL(Human placetal lactogen) ELISA Kit  人胎盤泌乳su規(guī)格： 48T

ABP(Human Androgen Binding Protein) ELISA Kit  人雄激su結(jié)合蛋白規(guī)格： 48T

ATA(Human trophoblast antibody,ATA ) ELISA Kit  人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞規(guī)格： 48T

aZP(Human zona pellucida antibody,aZP) ELISA Kit  人抗透明帶規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。