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ELISA試劑盒曲線(xiàn)問(wèn)題解析
閱讀：69 發(fā)布時(shí)間：2025-2-25 ELISA試劑盒試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線(xiàn)問(wèn)題的原因做了總結(jié)：
一 OD值不正常的可能原因是：
1、試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃；
2、溫度控制不好，控制正確溫度；
3、孵育時(shí)間不準(zhǔn)確，控制孵育時(shí)間；
4、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干；
5、陽(yáng)光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避光；
6、酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤，酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm；
7、抗體的稀釋錯(cuò)誤，正確的稀釋抗體；
8、水質(zhì)問(wèn)題，用娃哈哈礦泉水代替。
二 白板的可能原因是：
1、洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液；
2、少加液體（錯(cuò)加液體），正確的步驟加液體。
三 無(wú)梯度可能原因是：
1、標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板；
2、OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次；
3、人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板。
四 線(xiàn)性不好可能原因是：
OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次。
做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問(wèn)題需要注意：
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出來(lái)的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內(nèi)。
3、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999。