原位 PCR 技術(In situ PCR，Is PCR )是 Hasse 等人于 1990 年建立的技術，即在組織細胞里進行 PCR 反應，當時稱為“細胞內 PCR"(in cell PCR)。它結合了具有細胞定位能力的原位雜交技術和高度特異敏感性的 PCR 技術的優(yōu)點，能檢測出細胞內單拷貝及低拷貝的靶 DNA 或 RNA。

該方法就是利用完整的細胞作為一個微小的反應體系來擴增細胞內的目的片段，在不破壞細胞的前提下，利用一些特定的檢測手段來檢測細胞內的擴增產物。與原位雜交相比，原位 PCR 技術大大提高了檢測的靈敏度。原位技術既可以分辯鑒定帶有靶序列的細胞，又可以標出靶序列在細胞內的位置，對有效檢測各種病原菌和從分子及細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床轉歸過程具有重大的實用價值。

原位 PCR 技術作為一種病原體的檢測方法，其標記物的類型可分為兩種:非放射性標記法和放射性標記法。非放射性標記法包括如、生物素、過氧化物酶等，后者放射性標記法多采用放射性同位素 H3h 和 P32 等。

根據標記物摻入方法的不同，原位 PCR 方法分為兩大類:即在反應體系中使用標記的單核苷酸或引物的直接法原位 PCR(direct in situ PCR);所用引物和單核苷酸都不帶任何標記物，待反應結束后再用原位雜交技術檢測特異性擴增片段產物的間接法原位 PCR(indirect in situ PCR)。現(xiàn)在臨床上使用最多的是間接法原位 PCR，相對于直接法原位 PCR，它的特異性更高。

另外還有一種叫做原位反轉錄 PCR 的原位擴增方法是指在進行 PCR 之前首*行反轉錄過程(RT)，將反轉錄的產物作為模板用于擴增，這個過程叫做原位反轉錄 PCR(In situ reverse transcription PCR，簡稱原位 RT-PCR)。近年出現(xiàn)的原位環(huán)式等溫擴增，即在 Is PCR 原理基礎上進行了改進，穿透處理條件溫和，細胞不易破碎，設計的環(huán)狀引物使擴增產物分子量大，不易擴散，擴增溫度低且恒定，不使用 PCR 儀，細胞損失率大大降低。

欧美……一区二区三区,欧美日韩亚洲另类视频,亚洲国产欧美日韩中字,日本一区二区三区dvd视频在线

原位PCR分類

會員登錄

收藏該商鋪

提示