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技術服務：相對定量SYBR Green I 染料法
閱讀：1690 發(fā)布時間：2013-9-10相對定量SYBR Green I 染料法
熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析?？禐槭兰o提供利用熒光定量PCR的方法對樣品中的基因表達情況進行相對定量或定量分析的技術服務。
服務價格
相對定量SYBR GreenI 染料法 | ￥200/樣品•基因 | 4周 |
服務內(nèi)容
相對定量 （mRNA表達量分析）
基因表達的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時分別進行定量，然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。內(nèi)參基因通常選用表達量相對恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時對內(nèi)參基因的實時檢測，可以對樣品之間由于起始細胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析之目的。
定量
定量首先必須構建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，本公司服務內(nèi)容為采用TA克隆的方法構建標準品。使用已知濃度的標準品制作5個點以上的標準曲線后，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行量 （起始拷貝數(shù)）分析。
SYBR Green I 染料法
SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結合的熒光染料，SYBR Green I只與雙鏈DNA結合才能發(fā)出熒光，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，熒光信號與雙鏈DNA分子數(shù)成正比，隨著擴增產(chǎn)物增加而增加，熒光信號的強度代表了反應體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。以SYBR Green I作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為染料法。
TaqMan探針法
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累，因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。以Taqman探針作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為探針法。
服務優(yōu)勢
·先進的儀器，的試劑，專業(yè)的團隊，實驗結果更可靠。
·免費設計優(yōu)化引物，使定量PCR反應擴增效率達到90%以上，使相對定量結果更可靠。
樣品要求
客戶需提供組織、細胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：
材料種類 | 樣品要求 | 起始量 | 保存及運輸方式 |
血液 | 新鮮血液及抗凝劑處理的全血 | 1ml | 加入Trizol-80℃貯存，干冰運輸 |
培養(yǎng)細胞 | 離心收集的細胞 | 1x107 | |
動物組織 | 一般材料 | 100mg | -80℃或者液氮貯存，干冰運輸 |
植物 | 一般材料 | 100mg | |
| RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好 | >1ug | -80℃貯存，干冰運輸 |
| DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之間，完整性好 | >1ug | -20℃貯存，冰袋運輸 |
| cDNA | 內(nèi)參基因檢測成功 | >20ul |
終產(chǎn)品
·一對引物（上游引物和下游引物）及其序列；
·完整實驗報告；
·
服務說明
·客戶提供基因序列。
·如因?qū)嶒灢牧系确潜竟驹蛟斐赡硨嶒灢襟E失敗，使實驗提前終止，已啟動的實驗項目仍正常收費。
上海恒遠生物科技有限公司是一家立足于生命科學領域的解決方案提供商，全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術服務鏈，致力于提供全方面的解決方案。目前建立了一系列技術服務平臺。我們致力于每位客戶的滿意和成功，為客戶提供zui有競爭力的產(chǎn)品和解決方案，持續(xù)為客戶創(chuàng)造zui大價值。