Hepcidin,小鼠鐵調(diào)素酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠鐵調(diào)素（Hepcidin）的含量。

Hepcidin,小鼠鐵調(diào)素酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)

l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠鐵調(diào)素（Hepcidin）的含量。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠鐵調(diào)素（Hepcidin）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠鐵調(diào)素（Hepcidin）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

Hepcidin,小鼠鐵調(diào)素酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)需要但未提供的材料 

1. 可在450nm處進(jìn)行讀數(shù)的酶標(biāo)儀； 

2. 能精確吸取10-200µL的移液器； 

3. 可調(diào)多道（8）移液器（50－200µL）； 

4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽； 

5. 洗瓶或洗板機(jī)； 

6. 蒸餾水或去離子水； 

7. 1升的圓柱形量筒； 

8. 移液器：1和（10或25 mL）； 

9. 移液器槍頭； 

10. 紙巾； 

11. 計(jì)時(shí)器，用以監(jiān)控溫育步驟； 

12. 處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；  

注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室

溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中

不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。 

4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。  

保存： 貯藏于2-8°C。 

標(biāo)本收集 

1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織液標(biāo)本。 

2. 室溫（20－25℃）下保存標(biāo)本不要超過(guò)8小時(shí)。2－10℃保存標(biāo)本，不超過(guò)48小時(shí)。如

耽擱的時(shí)間更長(zhǎng)，請(qǐng)?jiān)?20℃或更低的溫度下保存標(biāo)本。標(biāo)本避免多次凍融，這樣可能會(huì)損失蛋白活性，產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。 

準(zhǔn)備工作

1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。  

操作步驟 

試劑盒應(yīng)平衡至室溫（20-25°C ）再試驗(yàn)。     取出所需反應(yīng)板。 

1. 加入10ul標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)、10ul標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。 

2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒，封

住板孔，室溫溫育 45分鐘。 

3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板（每孔內(nèi)加入350ul洗滌液），并去除水滴

（在厚疊吸水紙上拍干）；反復(fù)洗滌5次。 

4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫溫育20分鐘。 

5. 每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD

值。  

以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。