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PCR擴(kuò)增的重要標(biāo)準(zhǔn)
閱讀：2502 發(fā)布時(shí)間：2013-2-21什么是PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度?
靈敏度指的是PCR擴(kuò)增反應(yīng)能夠檢測到目的基因的zui小值.研究結(jié)果表明,影響PCR擴(kuò)增效率的因素,如模板的復(fù)雜程度與完整性、引物的純度及其與模板的結(jié)合效率、反應(yīng)溫度、DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性與擴(kuò)增性能、反應(yīng)緩沖液的離子組 成（主要指陽離子）、反應(yīng)優(yōu)化劑等等,都決定了PCR實(shí)驗(yàn)的檢測靈敏度.在*的擴(kuò)增條件下,常規(guī)PCR反應(yīng)能夠檢測到的pg（10-12g）數(shù)量級(jí)的目 的基因.對(duì)于一個(gè)特定的目的基因而言,模板與引物通常都是已經(jīng)限定好的因素.因此,選擇什么樣的PCR反應(yīng)體系（包括DNA聚合酶與反應(yīng)緩沖液等）就是研究者提高PCR實(shí)驗(yàn)靈敏度的關(guān)鍵因素了.
與實(shí)驗(yàn)室自配的PCR擴(kuò)增體系相比,東盛的Taq Mix對(duì)反應(yīng)緩沖液中的成分進(jìn)行優(yōu)化,并加入了適當(dāng)比例的反應(yīng)增強(qiáng)劑（PCR Enhancer）,提高了DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性,顯著降低模板的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)PCR擴(kuò)增性能的影響,使得DNA聚合酶處于zui適活性狀態(tài),從而獲得了比自 配體系更高的檢測靈敏度.即時(shí)反應(yīng)體系中只有幾個(gè)目的基因的拷貝,也能輕松檢測.
什么是PCR實(shí)驗(yàn)的特異性？
特異性指的是在PCR擴(kuò)增過程中,專一性地?cái)U(kuò)增目的片段而非其他片段的性 能.在PCR實(shí)驗(yàn)本身的靈敏度很高,且實(shí)驗(yàn)條件未充分優(yōu)化的情況,通常會(huì)在目的片段出現(xiàn)的同時(shí)伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象.模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性.近年來的研究結(jié)果表明,緩沖液的品質(zhì)（如離子種類與組成,反應(yīng)優(yōu)化劑等）對(duì)保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用.一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/（NH4）SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),顯著提高了PCR擴(kuò)增的特異性,降低背景.
PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性是一對(duì)此長彼消的特性,這也決定我們實(shí)驗(yàn)體系調(diào)節(jié)實(shí)際就是找到適合實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性的平衡點(diǎn).由于PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜.東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計(jì)了PCR Mix和HS Taq Mix,幫您確定大的平衡點(diǎn),如果您需要更細(xì)致的平衡點(diǎn),請(qǐng)選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào).