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細菌內(nèi)毒素分析
閱讀：2133 發(fā)布時間：2012-10-30氣相色譜（Gc）和質(zhì)譜（MS）聯(lián)用法是20世紀出現(xiàn)的一種內(nèi)毒素檢測方法。此法主要依據(jù)細菌內(nèi)毒素的主要毒性部分類脂A水解時產(chǎn)生一種3一羥基脂肪酸的物質(zhì)。這種物質(zhì)是內(nèi)毒素所*的，并不存在于其他自然界的物質(zhì)當中。每分子的類脂A含有4mol的3一羥基脂肪酸，類脂A的平均分子量為8000。通過對這種特異性3一羥基脂肪酸的檢測，可以定量檢測內(nèi)毒素的含量。由于儀器的限制，氣質(zhì)聯(lián)用的方法很難成為常規(guī)的細菌內(nèi)毒素檢測方法?！吨袊幍洹芳毦鷥?nèi)毒素檢查法是利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的*是否符合規(guī)定的一種方法。細菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。
一、家兔檢測法
1923年首先提出用家兔檢測熱原方法，1942年美國藥典將家兔法作為藥品的熱原檢查，為保障藥品質(zhì)量和用藥安全發(fā)揮了重要作用。
目前，對于熱原的概念國內(nèi)外仍未有*統(tǒng)一的認識。綜合國內(nèi)外文獻報道，普遍認為熱原的本質(zhì)就是細菌內(nèi)毒素的脂多糖。wHO文件中同樣提到，藥品中的熱原就是指細菌內(nèi)毒素，至少在藥檢范圍內(nèi)控制內(nèi)毒素就是控制熱原。嚴格地講，不是每一種熱原都具有脂多糖（1ipoplysaccharide，LPs）的結(jié)構(gòu)，在藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范條件下，藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制一般可以接受的觀點是：不存在細菌內(nèi)毒素意味著不存在熱原。多年來研究表明，熱原進人人體血液循環(huán)系統(tǒng)后，并不直接引起發(fā)熱和其他毒性反應，但它可使細胞釋放內(nèi)源性熱原物質(zhì)。
這種內(nèi)源性熱原可直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，刺激體溫中樞，引起機體發(fā)熱。作為熱原檢測法的家兔檢測法也就成為人們檢測內(nèi)毒素的zui早方法。此方法將一定量的被檢標本靜脈注入家兔體內(nèi)，觀察其注射后的發(fā)熱情況，以決定所檢標本中有無熱源存在。家兔檢測法為一種定性檢測內(nèi)毒素的方法，應用歷史較久。但隨著社會的進步、科技的發(fā)展，制藥工業(yè)飛速前進，新藥品種不斷增加，臨床用藥要求越來越高，家兔法局限性日益突出，如家兔對內(nèi)毒素在反應上有個體差異，敏感度不高，不能定量檢測內(nèi)毒素等，因此家兔檢測法現(xiàn)在已經(jīng)很少使用。
二、氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法
氣相色譜（Gc）和質(zhì)譜（MS）聯(lián)用法是20世紀出現(xiàn)的一種內(nèi)毒素檢測方法。此法主要依據(jù)細菌內(nèi)毒素的主要毒性部分類脂A水解時產(chǎn)生一種3一羥基脂肪酸的物質(zhì)。這種物質(zhì)是內(nèi)毒素所*的，并不存在于其他自然界的物質(zhì)當中。每分子的類脂A含有4mol的3一羥基脂肪酸，類脂A的平均分子量為8000。通過對這種特異性3一羥基脂肪酸的檢測，可以定量檢測內(nèi)毒素的含量。由于儀器的限制，氣質(zhì)聯(lián)用的方法很難成為常規(guī)的細菌內(nèi)毒素檢測方法。
三、《中國藥典》（2005年版）細菌內(nèi)毒素檢查法
本法是利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的*是否符合規(guī)定的一種方法。細菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時，可使用其中任何一種方法進行試驗。當測定結(jié)果有爭議時，除另有規(guī)定外，以凝膠法的結(jié)果為準。凝膠法是通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應的原理來檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。