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如何做好ELISA實(shí)驗(yàn)?
閱讀：1098 發(fā)布時(shí)間：2021-1-29在生產(chǎn)過(guò)程中，不同批次的試劑的質(zhì)量，保證*一致非常困難，ELISA試劑盒甚至通過(guò)批檢驗(yàn)項(xiàng)目和結(jié)果也不同，因此必須選擇和訂購(gòu)試劑長(zhǎng)批次，并確保小鼠ELISA試劑盒保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和復(fù)雜的過(guò)程，重新評(píng)價(jià)試劑重新建立，并能保證結(jié)果的穩(wěn)定性；有效期短，使用率低的試劑，應(yīng)小包裝，包裝，可每次都是采取，以避免重復(fù)凍融破壞試劑引起的。
在Elisa試劑盒的使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題有很多如， 加樣器不確；尤其10ul以下的加樣器，對(duì)結(jié)果影響很大； 保溫設(shè)備不良； 洗滌用水不規(guī)范。
如何解決這些問(wèn)題呢：
1在使用過(guò)程校正加樣器；10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品（芬蘭、法國(guó)等）；
2 仔細(xì)校正溫度到37℃，水浴箱為佳；
3 必須使用去離子水或蒸餾水，不得用自來(lái)水、礦泉水等；
4 認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書。
樣品加樣：
1 加樣不準(zhǔn)確； 2 沒(méi)有混勻。 加樣時(shí)一定要仔細(xì)。加樣后，再檢查，以防漏加、錯(cuò)加。
2 加樣后，反復(fù)抽吸3次混勻，防止血清聚集孔底，導(dǎo)致非特異性吸附。 洗滌 洗滌不* ①每次注水洗滌，應(yīng)靜止30秒鐘；②選用吸水紙作為襯墊，每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分；
3 可選用塑料洗滌瓶。 加酶反應(yīng) 漏加 滴加后，認(rèn)真檢查各孔 結(jié)果判斷 ①包括陰性對(duì)照孔在內(nèi)，各孔顯色普遍偏深；②包括陽(yáng)性對(duì)照在內(nèi)，各孔均無(wú)顯色；③陽(yáng)性對(duì)照不顯色，而其它樣本顯色正常；
4 有些標(biāo)本顯色不深，判斷陽(yáng)性困難。 ①可能是洗滌不充分；加樣過(guò)量；溫育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)溫度過(guò)高；按說(shuō)明書重新操作。如無(wú)改善， 可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；②可能是漏加樣本或酶液；溫育時(shí)間過(guò)短溫度過(guò)低；試劑保存不當(dāng)活性下降；按說(shuō)明書重新 操作。如無(wú)改善，可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；③陽(yáng)性對(duì)照漏加、錯(cuò)加或失效。重新操作。如無(wú)改善，可與廠家聯(lián)系，索要對(duì)照品； ④重新操作。使用酶標(biāo)儀，測(cè)定光吸收度，按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷。 ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放。不得過(guò)高，也不得凍存（凍存后，酶液將失效）。 對(duì)照品 對(duì)照品為凍干品 按對(duì)照管標(biāo)示，加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶，充分溶解混勻?？砂凑f(shuō)明書使用。
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