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貨物所在地：北京北京市
所在地： 北京
更新時間：2025-02-27 21:00:08
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產(chǎn)品簡介 ：
NADP + 和 NADPH 含量測定可以計算 NADP（NADPH + NADP + )含量和 NADPH/NADP + 比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。 NADPH/NADP + 比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一，而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP + 和 NADPH。NADPH 通過 PMS 的遞氫作用，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚，570nm 下檢測吸光值，從而測定 NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP + 為 NADPH，從而檢測 NADP + 含量。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計或酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿或酶標板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容 ：
酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
堿性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：基質(zhì)緩沖液 15 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20 ℃保存，用時加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑四：粉劑×1 支，4 ℃保存，用時加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑五：液體 1.8mL×1 支，4 ℃保存；
試劑六：液體 30mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
操作步驟 ：
一 、NADP 和 和 NADPH 的提取 ：
1、血清（漿）中 NADP 和 NADPH 的提?。?/strong>
取 0.1mL 血清（漿），加入 0.9mL 酸性提取液，煮沸 5min；冰浴中冷卻后，10000g 4℃離心 10min；
取上清液另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和；10000g 4℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADP + 含量。
取 0.1mL 血清（漿），加入 0.9mL 堿性提取液，煮沸 5min,冰浴中冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，10000g 4℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADPH 含量。
2、組織中 NADP 和 NADPH 的提取：
稱取約 0.1g 組織， 加入 0.9mL 酸性提取液， 冰浴研磨， 煮沸 5min， 冰浴中冷卻后， 10000g 4℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，10000g 4℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADP + 含量。
稱取約 0.1g 組織， 加入 0.9mL 堿性提取液， 冰浴研磨， 煮沸 5min， 冰浴中冷卻后， 10000g 4℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，10000g 4℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADPH 含量。
3、細胞或細菌中 NADP 和 NADPH 的提?。?/strong>
先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加入 0.9mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強度20％，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADP + 含量。
先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加入 0.9mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強度20％，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液冰上保存供測定 NADPH 含量。
二 、 測定步驟( 在 在 1.5mLEP 管中按下表依次加樣 ） ：
| 試劑名稱 | 測定孔(µL) |
| 樣本 | 50 |
| 雙蒸水 | |
| 試劑一 | 250 |
| 試劑二 | 75 |
| 試劑三 | 75 |
| 試劑四 | 75 |
| 試劑五 | 35 |
| 對照管可以只做一個，不需每一個樣品都多一個對照。充分混勻后，室溫避光靜置 40min | |
| 試劑六 | 500 |
| 充分混勻，靜置 5min 后，20000g，4℃離心 5min，棄上清，沉淀中加入 | |
| 試劑七 | 1000 |
混勻，570nm 下比色。
注意事項
1、若用比色皿測，沉淀用試劑七溶解后必須立即測。好加一個測一個。
2、若用酶標板測，也必須在測定時再加試劑七，加入 1000µL 試劑七溶解沉淀，混勻后，取 300µL 酶標板中，立即測定。
3、不可將試劑一、二、三和四混合后再加，必須分開加。
三 、NADP + 和 和 NADPH 含量的計算 ：
（一）NADP+含量的計算
1、血清（漿）中 NADP + 含量計算
NADP + 含量(µmol/L）= (測定管 OD 值-0.047）×376
2、組織中 NADP + 含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADP + (µmol/g prot）= (測定管 OD 值-0.047）×37.6÷樣本蛋白濃度（g/L）
(2)按樣本鮮重計算
NADP + (µmol/g mass）= (測定管 OD 值-0.047）×37.6÷樣本鮮重（g/L）
3、細胞或細菌中 NADP + 含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADP + (µmol/g prot）= (測定管 OD 值-0.047）×37.6÷樣本蛋白濃度（g/L）
(2)按細菌或細胞密度計算
NADP + (µmol/10 4 cell）= (測定管 OD 值-0.047）×37.6÷細菌或細胞（10 4 cell /L）
（二）NADPH 含量的計算
1、血清（漿）中 NADPH 含量計算
NADPH 含量(µmol/L）= (測定管 OD 值-0.047）×855
2、組織中 NADPH 含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADPH (µmol/g prot）= (測定管 OD 值-0.047）×85.5÷樣本蛋白濃度（g/L）
(2)按樣本鮮重計算
NADPH (µmol/g mass）= (測定管 OD 值-0.047）×85.5÷樣本鮮重（g/L）
3、細胞或細菌中 NADPH 含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADPH (µmol/g prot）= (測定管 OD 值-0.047）×85.5÷樣本蛋白濃度（g/L）
(2)按細菌或細胞密度計算
NADPH (µmol/10 4 cell）= (測定管 OD 值-0.047）×85.5÷細菌或細胞密度（10 4 cell /L）。
輔酶ⅡNADP（H）含量試劑盒
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