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高鐵血紅蛋白（MetHb）含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5600

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，即為10mg/mL血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，2-8℃可保存4周。

2. 0.625 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品配制：取50μL 10mg/mL血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，加入750μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.625mg/mL的血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：

高鐵血紅蛋白（Methemoglobin，MetHb）為血紅蛋白的氧化物，是血紅蛋白分子內(nèi)的亞鐵離子被氧化成三價(jià)鐵離子形成的。血紅蛋白具有攜氧能力，氧化后的高鐵血紅蛋白失去攜氧能力，測定高鐵血紅蛋白含量可以衡量血液及紅細(xì)胞代用品攜氧能力，其測定方法對臨床診斷高鐵血紅蛋白血癥和研制紅細(xì)胞代用品具有重要意義。

血紅蛋白與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白，脫氧后為脫氧血紅蛋白，分別測定氧合血紅蛋白、脫氧血紅蛋白和高鐵血紅蛋白在560nm、576nm、630nm處的吸光值，利用各組分在特定波長的消光系數(shù)，可計(jì)算各組分的質(zhì)量濃度百分比，再測出樣本的總血紅蛋白含量，即可計(jì)算得到樣本的高鐵血紅蛋白含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

1. 如果A總大于1.0，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測定，計(jì)算公式中注意同步修改。

2. 如果A總小于0.01或接近空白管吸光值，可適當(dāng)增大樣本量，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 將兔紅細(xì)胞，用蒸餾水稀釋100倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得并計(jì)算ΔA總=A總-A空白=0.537-0.007 =0.530，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=0.741，A576=1.218，A630=0.104；計(jì)算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F=91.51 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.2380÷（0.2380+0.6509+0.0329）×100%=25.82%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=23.627mg/mL

2. 將兔全血，用蒸餾水稀釋160倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA總=A總-A空白= 0.570-0.007 =0.563，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.111，A576=1.650，A630=0.072，計(jì)算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F=155.525 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.084÷（0.2402+0.8292+0.0840）×100%=7.283%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=11.33mg/mL

3. 將小鼠全血，用蒸餾水稀釋160倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得并計(jì)算ΔA總=A總-A空白= 0.787-0.007=0.780，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.518，A576=1.821，A630=0.373，計(jì)算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F=215.47 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.8201÷（0.4564+0.5931+0.8201）×100%=43.86%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=95.51mg/mL

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