解決方案——食品中維生素C的測定
抗壞血酸，是一種多羥基化合物，化學式為C6H8O6，具有2個手性碳原子，分為L-抗壞血酸和D-抗壞血酸。L-抗壞血酸為左式右旋光抗壞血酸，具有強還原性，對人體具有生物活性；D-抗壞血酸又稱異抗壞血酸，具有強還原性，但對人體無生物活性。
L-抗壞血酸，常稱維生素C，廣泛存在于新鮮的蔬菜水果中，如西紅柿、菜花、柿子椒、深色葉菜、苦瓜，柑橘、柚子、蘋果、葡萄、獼猴桃、鮮棗等；人工合成維生素常添加于功能飲料、功能性保健食品中，作抗氧化作用，清除自由基、促進抗體形成及參與人體內(nèi)許多重要的生物合成反應。
D-抗壞血酸是以葡萄糖等為原料，經(jīng)發(fā)酵制得的2-酮基-D-萄糖酸，再經(jīng)酯化、酸化、精制等步驟生產(chǎn)的食品添加劑，一般作護色劑和防腐劑，常用于肉類制品、魚肉制品、水果罐頭等食品加工中，防止細菌生長、與亞硝酸鹽、硝酸鹽合用提高肉類制品的發(fā)色效果。
《食品安全國家標準 食品中抗壞血酸的測定GB 5009.86-2016 》規(guī)定了L-抗壞血酸和D-抗壞血酸的測定，但不同構(gòu)型的抗壞血酸在食品中作用差異巨大，因此，考察L-抗壞血酸和D-抗壞血酸的分離度、方法穩(wěn)定性和結(jié)果重現(xiàn)性至關重要。
抗壞血酸屬于大極性化合物，在C18柱上保留弱、出峰時間過早，容易與溶劑峰發(fā)生重疊，影響抗壞血酸的定性和定量。但我們可以從兩方面來增強抗壞血酸在色譜柱上的保留，避免溶劑峰干擾：一點、流動相中加入離子對試劑，延長抗壞血酸的保留時間；二、使用混合模式的色譜柱Acclaim Mixed-Mode WAX-1，擁有疏水性烷基鏈和可電離的叔胺末端，提供疏水性反相保留和弱陰離子交換，大大提高了極性化合物在色譜柱上的保留能力。
| 解決方案 | 加入離子對試劑 | 使用混合模式色譜柱 |
| 色譜柱 | 普通C18色譜柱 | Acclaim Mixed-Mode WAX-1 |
| 流動相 | A: 6.8g磷酸二氫鉀和0.91g十六烷基三甲基溴化銨，用水溶解，磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5~2.8，定容至1L, B:甲醇; A: B=98:2 | A: 25mM磷酸氫二銨（磷酸調(diào)pH至6.0）, B:乙腈; A: B=98:2 |
| 流速 | 0.7mL/min | 0.8mL/min |
| 波長 | 245nm | 245nm |
| 優(yōu)缺點 | 離子對試劑——十六烷基三甲基溴化銨使抗壞血酸得到保留，但方法不穩(wěn)定，連續(xù)進樣保留時間會往后漂移，且L-抗壞血酸和D-抗壞血酸分離度也會變差。 | 未使用離子對試劑，流動相為常規(guī)試劑，不會對色譜柱造成不可逆的損傷；方法穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。 |
| 推薦指數(shù) | ★★★ | ★★★★★ |
Acclaim Mixed-Mode WAX-1測試維生素C譜圖
L-抗壞血酸和D-抗壞血酸連續(xù)6針進樣，保留時間RSD均小于0.5%，響應值RSD均小于1.0%。
| 色譜柱信息 | |
| 名稱 | Thermo Scientific™ Acclaim Mixed-Mode WAX-1 |
| 規(guī)格 | 5 μm, 4.6×250 mm |
| 貨號 | 064985 |
參考文獻：
Thermo Scientific™ application, Acclaim Mixed-Mode WAX-1 應用于食品中L-抗壞血酸和 D-異抗壞血酸的測定
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