脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒

時間：2011/11/4閱讀：1787

脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒

（德國IBL進(jìn)口原裝，貨號：RE56921）

德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)

1、應(yīng)用范圍

脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體ELISA試劑盒可用于血清和血漿中抗脊髓灰質(zhì)炎特異性IgG抗體的定量檢測。此試劑盒也可用來檢測其它體液，您可從IBL公司獲取。此試劑盒僅供體外診斷用。

實驗結(jié)果從來都不可以作為醫(yī)學(xué)報告的*依據(jù)，醫(yī)學(xué)報告還得考慮病人病史和進(jìn)行進(jìn)一步的檢測。

2、前言說明

脊髓灰質(zhì)炎是一種由腸道病毒引起的傳染病，它廣泛流行于世界各地，并常常導(dǎo)致病人癱瘓和死亡。人類目前知道的人致病性脊髓灰質(zhì)炎有三種類型：

1類（Brunhilde）：通常會產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀。

2類（Lansing）：出現(xiàn)稍微溫和的癥狀。

3類（Leon）：少，但伴隨嚴(yán)重癥狀。

脊髓灰質(zhì)炎病毒主要增生擴(kuò)展在腸道的淋巴節(jié)內(nèi)，并通過糞便排泄出去。咽喉也可能會感染脊髓灰質(zhì)炎病毒，之后病毒就會在人體口腔內(nèi)。人感染脊髓灰質(zhì)炎后，病毒就可以通過單核細(xì)胞分布到其它淋巴節(jié)，之后在淋巴節(jié)繁殖成各種各樣的脊髓灰質(zhì)炎病毒。在第二個viremic階段，病毒就停留在所有的器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰質(zhì)炎的病人都不會出現(xiàn)任何主觀癥狀。在其它剩余的病例中會出現(xiàn)：伴隨低燒的非特異性疾病、頭痛和喉嚨發(fā)炎、痢疾、惡心和嘔吐。伴隨有肌肉疼痛和大腦神經(jīng)的經(jīng)典麻痹癥非常少見。再次康復(fù)階段要持續(xù)兩年，而且常常會出現(xiàn)持久的破壞。脊髓灰質(zhì)炎目前還沒有治療方法，僅用阿司匹林和體操的對癥治療會有些效果。在亞洲地區(qū)的很多國家中，脊髓灰質(zhì)炎仍然是地方性的，但WHO已開始了巨大的工程來*此疾病。在歐洲會有因旅游者帶進(jìn)的脊髓灰質(zhì)炎病例存在，有時候還是致命性的。在病毒潛伏期，通過檢測糞便或咽喉沖洗物中的傳染原或檢測血液中的抗體可診斷脊髓灰質(zhì)炎。血液抗體的檢測通常是通過中和檢測進(jìn)行的，雙份血清檢測有滴度差異，所以三種類型脊髓灰質(zhì)炎病毒必須分別檢測。zui近，脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA實驗用類似白喉和百日咳的方法進(jìn)行了改進(jìn)，這種新的ELISA試劑盒可同時檢測三種類型的脊髓灰質(zhì)炎病毒。這種血清學(xué)反應(yīng)是由既往感染或免疫接種所導(dǎo)致的。

3、實驗原理

脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測試劑采用酶聯(lián)免疫的原理。脊髓灰質(zhì)炎抗原包被在包被板板條的微孔上。在包被板的微孔中加入稀釋好的病人血清或即用型的標(biāo)準(zhǔn)品，之后血清中的IgG抗體會結(jié)合到固相脊髓灰質(zhì)炎抗原上。室溫下溫育1小時后，用洗滌液洗板除去未結(jié)合的物質(zhì)。之后加入過氧酶標(biāo)記的即用型抗人IgG，溫育30分鐘。之后再洗板，洗板后加入TMB底物液并溫育20分鐘，此時溶液變成藍(lán)色。加入終止液終止酶反應(yīng)，溶液又藍(lán)色變成黃色，450nm處檢測OD值。IgG抗體的濃度與溶液所顯示的顏色強(qiáng)度成正比。

4、儲存與穩(wěn)定性

將試劑盒儲存于2-8℃的環(huán)境下，有效期（標(biāo)記在標(biāo)簽上面）內(nèi)穩(wěn)定。使用前，將所有成分平衡至室溫（18-25℃）。不用的板條應(yīng)當(dāng)重新密封好，試劑瓶的蓋子要蓋好，并儲存于2-8℃的環(huán)境下。打開了的試劑盒必須在三個月內(nèi)用完。

5、樣品的采集與儲存

血清，血漿（EDTA，肝素）

按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學(xué)完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品?；鞚岬臉悠窇?yīng)當(dāng)在實驗開始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。
儲存	2-8℃	≤-20℃	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融。
穩(wěn)定性	48小時	＞48小時	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融。

6、試劑盒成分

4×2ml	CAL A-D	標(biāo)準(zhǔn)品A-d：PBS稀釋的人血清，內(nèi)含抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體，另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane，即用。
1×14ml	ENZCONJ IgG	酶聯(lián)物：辣根過氧酶標(biāo)記的抗人IgG和蛋白緩沖液。另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane及5mg/l的Proclin^TM，即用。
1×12×8	MTP	包被板：12條8孔的包被板，包被了脊髓灰質(zhì)炎抗原（純化病毒材料的疫苗，混合有1，2，3型病毒），即用。
1×14ml	TMB SUBS	TMB底物液，內(nèi)含TMB，即用。
1×14ml	TMB STOP	TMB終止液，0.5M的硫酸，即用。
1×60ml	DILBUF	稀釋緩沖液，PBS/BSA緩沖液，內(nèi)含0.095%的疊氮鈉，即用。
1×60ml	WASHBUF CON	洗滌緩沖液，10倍濃縮，PBS+吐溫20。
2×	FOIL	粘性金屬板，溫育期間用來蓋板用。
1×	BAG	塑料袋，可重新密封，用來儲存不用的板條。

7、實驗所需材料但試劑盒不提供

1） 5ul，100ul和500ul的多道移液器。

2）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀。

3）洗板機(jī)

4）用于血清稀釋的試管

5）蒸餾水

8、實驗前的準(zhǔn)備說明

8.1成分的準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋劑	比例	備注	儲存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加入540ml	蒸餾水	1：10	如果有必要的話，加熱到37℃以溶解所有晶體，混合均勻	2-8℃	8周

8.2樣品的稀釋

樣品	稀釋	稀釋劑	比例	備注
血清/血漿	一般規(guī)律稀釋	稀釋緩沖液	1：101	5ul+500ul

如果樣品中的IgG濃度比zui高標(biāo)準(zhǔn)品的都要高，則樣品必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。

11、實驗步驟

1	給標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（雙份檢測）準(zhǔn)備足夠的板條，留一孔做空白對照。
2	將稀釋好的樣品、即用的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品各100ul分別加入到相應(yīng)的微孔中，留出空白孔不要加，用來加底物液。
3	蓋板，室溫溫育60分鐘。
4	棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復(fù)洗板3次，棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
5	在每一微孔中加入100ul即用型的酶聯(lián)物，留出空白孔不要加。
6	蓋板，室溫溫育30分鐘。
7	棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復(fù)洗板3次，棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
8	在每一微孔中加入100ul即用型的底物液，留出空白孔不要加。
9	蓋板，室溫避光溫育20分鐘。
10	在每一微孔中加入100ul即用型的終止液以終止底物反應(yīng)，空白孔也要加底物液。
11	充分混合，450nm處讀取OD值，溶液所顯示的顏色60min內(nèi)穩(wěn)定。

12、質(zhì)量控制

嚴(yán)格按照實驗步驟的實驗結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實驗準(zhǔn)則或其它實驗標(biāo)準(zhǔn)。就如試劑瓶標(biāo)簽所述：所有的控制品都必須建立在一個可以接受的范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求，那么實驗則無效，必須重做。為了能進(jìn)一步研究，每個實驗室都必須知道所有的樣品。如果實驗背離實際結(jié)果，應(yīng)檢查以下參數(shù)：試劑有效期，貯存條件，取樣器，實驗設(shè)備，溫育時間，清洗方法。

13、結(jié)果評價

平均OD值是檢測OD值減去空白孔數(shù)值之后的平均值，兩孔間數(shù)值的差異不能超過10%。

	OD值	矯正后的OD值	平均OD值
空白孔	0.019
標(biāo)準(zhǔn)品A（陰性質(zhì)控）	0.112/0.134	0.103/0.115	0.109
標(biāo)準(zhǔn)品B（臨界質(zhì)控）	0.410/0.472	0.391/0.453	0.421
標(biāo)準(zhǔn)品C（弱陽性質(zhì)控）	1.069/1.121	1.050/1.102	1.076
標(biāo)準(zhǔn)品D（陽性質(zhì)控）	2.186/2.220	2.167/2.201	2.184

上面表格只是個例子，所有數(shù)值都是當(dāng)時的溫度和條件下獲得的，因此上述數(shù)值不能當(dāng)作參考值，參考值必須從其它實驗室去獲取。

13.1定量評價

脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體檢測試劑盒的即用型標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品用的是一個專門的單位進(jìn)行定義表述的（U/ml）。如果實驗結(jié)果并且可以重復(fù)定量評價的話，則結(jié)果有可能可以作為后續(xù)病人的質(zhì)控品。質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的濃度請見試劑瓶標(biāo)簽。定量檢測時，用標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的OD值對其濃度在坐標(biāo)紙上進(jìn)行標(biāo)繪，之后每一病人樣品的濃度值可以用其OD值從此參考曲線上定量得到。我們可以用計算機(jī)程序自動計算記過，濃度計算時，樣品的稀釋因子要重新被考慮進(jìn)去。

14、特性

將弱陽性質(zhì)控重復(fù)檢測10次可以得到脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG試劑盒的板內(nèi)差異，其板內(nèi)差異小于10%。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

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