小規(guī)模制備噬菌體上清

[器材和試劑]

● 噬菌體緩沖液

● XLl-Blue TB細(xì)胞

● LB-瓊脂培養(yǎng)基+Amp/G1u平板

● LB+Amp；

● M13K07輔助噬菌體（Amersham Biosciences） 、

● IPTG

[方法]

1．用巴氏吸管從單個(gè)噬菌斑中挑取噬菌體，并轉(zhuǎn)移到裝有200ul噬菌體緩沖液的微量管中。

2．70℃加熱20分鐘，再離心30分鐘以除去噬菌體上清液中的細(xì)菌。

3．用稀釋的含噬菌體的上清，感染X11-BlueTB細(xì)胞。噬菌體上清可于4℃保存。

4．無(wú)攪動(dòng)孵育15分鐘，然后在37℃下劇烈振蕩孵育30分鐘。

5．鋪在LD-瓊脂培養(yǎng)基+Amp/G1u平板上，37℃孵育過(guò)夜。

6．在2m1 LB+Amp培養(yǎng)液中接種單個(gè)菌落，并在37℃下劇烈振蕩孵育（>350r/min），直到細(xì)胞密度達(dá)到OD₆₀₀＝0．25。

7．37℃下極溫和攪動(dòng)孵育15分鐘。

8．用輔助噬菌體M13K07（moi＝30）超感染，并加IPTG（終濃度為0．1mmol/L），溫和混合10分鐘，而后37℃下劇烈振蕩孵育5小時(shí)。

9。將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到微量管中，以zui大速度離心30分鐘除去細(xì)菌；并在4℃保存噬菌體上清。其滴度一般高于1×10¹⁰TU/m1。

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