全自動(dòng)酶免疫分析儀的基本原理和測(cè)定模式

    目前絕大部分全自動(dòng)免疫分析儀所采用的測(cè)定原理是酶免疫試驗(yàn)，這些分析儀又可稱為全自動(dòng)酶免疫分析儀，這一類分析儀根據(jù)其所用試劑是否為，又可分為試劑“限定”和試劑“開(kāi)放”兩類，試劑開(kāi)放的全自動(dòng)酶免疫分析儀相對(duì)較少，如BIO-RAD公司的CODA和Per—sonal Lab等；而試劑限定的全自動(dòng)酶免疫分析儀則種類較多，如Roche公司的COBASeCOREⅡ和ENZYME SYSTEM（ES），ABBOTT公司的AXSYM@和IMX，生物梅里埃的VIADS@，強(qiáng)生公司的VitrosECi@，BECKMANCOULTER公司的Access@和DPC公司的IMMULITE④2000等。這兩類全自動(dòng)酶免疫分析儀均采用ELISA測(cè)定的基本原理，尤其是試劑開(kāi)放類，其只不過(guò)是將加樣、溫育、洗板等ELISA基本測(cè)定過(guò)程由手工操作改為機(jī)器操作而已。如果根據(jù)zui后的酶與底物的反應(yīng)產(chǎn)物，又可將全自動(dòng)酶免疫分析儀分為顯色測(cè)定、熒光測(cè)定和發(fā)光測(cè)定三類。根據(jù)標(biāo)記用酶也可分為辣根過(guò)氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶標(biāo)記類。本處主要按照顯色、熒光和發(fā)光測(cè)定方式對(duì)試劑限定的全自動(dòng)酶免疫分析儀的基本測(cè)定原理和模式作一介紹。

一、顯色測(cè)定類

    Roche公司的COBASeCOREⅡ和ENZYME SYSTEM（ES）全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)

    Roche公司的COBAS*COREⅡ全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)以塑料珠（直徑0．6cm）作為固相載體，以辣根過(guò)氧化物酶（HRP）作為標(biāo)記用酶，顯色底物為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。在固相上每完成一次抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，儀器內(nèi)所安有特殊的洗滌裝置即可快速滾動(dòng)清洗塑料珠，以去除未結(jié)合的抗原、抗體和酶結(jié)合物。ES型全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)則以鏈霉親合素包被的聚苯烯塑料小管為固相載體，擬固相化的抗體或抗原可通過(guò)生物素而間接吸附，這種抗體或抗原的匿相化技術(shù)zui初是Boehringer-Mannheim公司的。本系統(tǒng)的標(biāo)記用酶也是HRP，但底物有所不同，用的是ABTS。

二、熒光測(cè)定類

    （一）ABBOTT公司的IMX和AXSYM~全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)

    ABBOTT公司的IMX全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)所采用的固相為表面多孔的塑料微顆粒，直徑0．5tzm。標(biāo)記用酶為堿性磷酸酶，酶底物為4—甲基傘型酮磷酸鹽（4—MUP），由于4—MU正在堿性磷酸酶的作用下生成4—甲基傘型酮，其在360nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448nm熒光，因而zui終根據(jù)所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度來(lái)計(jì)算所測(cè)物質(zhì)的濃度。值得提一下的是這種酶免疫分析系統(tǒng)的洗滌分離過(guò)程，即抗原抗體結(jié)合反應(yīng)在塑料微顆粒固相上完成后，儀器將微顆粒轉(zhuǎn)移至特定的玻璃纖維上，加入洗滌緩沖液，沒(méi)有結(jié)合的抗原或抗體被洗滌下去，而結(jié)合于塑料微粒固相上的抗原抗體則因微粒與玻璃纖維的不可逆結(jié)合而保留在玻璃纖維上。因此，這種洗滌分離的效果較好。

    ABBOTT公司的AXSYM*全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)其實(shí)是IMX和TDX（采用熒光偏振免疫分析方法）兩種免疫分析儀的綜合，因此，這種全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)除了能進(jìn)行IMX所具有的酶免疫分析外，還能進(jìn)行TDX的熒光偏振免疫分析，對(duì)于臨床一些小分子如藥物的測(cè)定更為方便。

    （二）生物梅里埃的VIADS@全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)

    該分析系統(tǒng)的測(cè)定基本原理與ABBOTT公司的IMX有些類似，即其也是以堿性磷酸酶作為標(biāo)記用酶，以4—MUP作為酶的熒光底物，zui后檢測(cè)的也是熒光。所不同的是該系統(tǒng)的反應(yīng)固相為塑料吸頭（solidphasepeceptacle，SRP）的內(nèi)表面，通過(guò)儀器自動(dòng)進(jìn)行地抽吸，而在吸頭內(nèi)表面完成抗原抗體結(jié)合反應(yīng)、洗滌分離和熒光激發(fā)過(guò)程。

三、發(fā)光測(cè)定類

    （一）強(qiáng)生公司的VitrosECi@全自動(dòng)增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析系統(tǒng)

    該酶免疫分析系統(tǒng)以子彈頭型小孔管為固相載體，HRP為標(biāo)記用酶，底物魯米諾為HRF的發(fā)光底物，本系統(tǒng)使用了化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑3—氯—4—羥基乙酰苯胺，其不但使化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度比單獨(dú)魯米諾發(fā)光強(qiáng)，而且穩(wěn)定，并持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，增加了測(cè)定的敏感性。該測(cè)定系統(tǒng)的固相載體表面亦預(yù)先包被了鏈霉親合素，抗體或抗原通過(guò)生物素而間接吸附。

    （二）BECKMANCOULTER公司的Access@全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光酶免疫分析系統(tǒng)

    該系統(tǒng)以核心為三氧化二鐵外包聚苯烯的順磁性微粒子作為固相載體，以堿性磷酸酶作為標(biāo)記用酶，使用一種新型的堿性磷酸酶底物AMPPD（dioxetanes）作為發(fā)光底物，這種底物的分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)重要部分：一個(gè)是連接苯環(huán)和金剛烷的二氧環(huán)，它可以斷裂并發(fā)射光子；另一個(gè)是磷酸基團(tuán)，它維持整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在堿性磷酸酶的作用下，這種底物迅速脫去磷酸基團(tuán)，生成不穩(wěn)定的中間體AMPD。AMPD很快自行分解，從高能激發(fā)態(tài)回到低能穩(wěn)定態(tài)，同時(shí)發(fā)出光子。這種化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定，持續(xù)時(shí)間可達(dá)數(shù)小時(shí)，容易測(cè)定，也容易控制。由于該系統(tǒng)的固相為順磁顆粒，在加入電磁場(chǎng)時(shí)，顆粒會(huì)迅速下沉吸附，達(dá)到固相與液相的分離，洗滌分離簡(jiǎn)單快速，加快了整個(gè)測(cè)定系統(tǒng)的測(cè)定速度。

    （三）DPC公司的IMMULITE⑦2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析系統(tǒng)

    該系統(tǒng)以聚苯烯塑料珠為固相載體，以堿性磷酸酶作為標(biāo)記用酶，同樣以AMPPD為底物。將未結(jié)合的抗原或抗體及酶結(jié)合物從固相洗去的方法是離心洗滌。

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