人流行性乙腦IgM抗體（JE IgM）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

                            本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱(chēng)：

通用名：人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒定性測(cè)定人血液、或其它相關(guān)組織中流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）

實(shí)驗(yàn)原理：

    本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人流行性乙腦IgM 抗體（JE

IgM）。用純化的流行性乙腦IgM  抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中人流行性乙

腦IgM 抗體（JE   IgM）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的流行

性乙腦IgM 抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm

波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中人流行性乙腦IgM 抗

體（JE IgM）的存在與否。

試劑盒組成：

  1   20 倍濃縮洗滌液         50ml×1 瓶  7      終止液                      6ml×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑              6ml×1/瓶      8   標(biāo)準(zhǔn)品（陽(yáng)性對(duì)照）                0.5ml×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板             12 孔×8 條  9      標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（陰性對(duì)照） 0.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液             6ml×1 瓶      10  說(shuō)明書(shū)                      1 份

  5   顯色劑A 液            6ml×1 瓶      11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑B 液            6ml×1 瓶      12  密封袋                      1 個(gè)

標(biāo)本要求：

    1．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)

    2．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，

       但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步驟：

1.  編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1

    孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)

    樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，

    盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至1000ml 后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

    重復(fù)5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

    試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.10

    臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

    陰性判定：樣品OD 值<          臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陰性

    陽(yáng)性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M  的硫酸，使用時(shí)必須

   注意安全。

規(guī)格：

     96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月

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