FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit

動物組織/細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑he

（離心柱型）

組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he

目錄號:40017

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑:

無水乙醇，RNase A（可選）

保存條件:

室溫（15~25℃）

蛋白酶K，室溫可保存 6 個月，4℃保存 12 個月，- 20℃保存 2 年。

產(chǎn)品簡介:

 適用于從動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

 本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 簡便快速：30 min內(nèi)可獲得高純度的基因組DNA。

2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提。

3. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達(dá)30～50kb，可直接進(jìn)行 PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

1. 如果裂解液TL、結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游 酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。

操作步驟:

第一次使用前，請先在漂洗液 WB 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl平衡液，12,000rpm離心1min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

2. 材料處理：

a. 動物組織

將動物組織在液氮中研磨成細(xì)粉（或者用解剖dao切成小碎塊），取約 25mg轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中，加入180μl裂解液TL，再加入20μl蛋白酶K溶液，振蕩至che底懸浮，56℃水浴1~3小時，直至組織wan全消化溶解。

推薦樣本投入量：動物組織≤25 mg，動物脾臟≤10 mg。

鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為0.6 cm長片段，小鼠鼠尾巴最大用量為1.2cm長片段，并將裂解時間延長至6-8小時。

注意：水浴過程中，每10分鐘顛倒混勻一次，可促進(jìn)細(xì)胞裂解。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞

①  105~ 106懸浮細(xì)胞到一個 1.5 ml 離心管；對于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先 用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。

②  13,000rpm離心10sec，吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)和大約 10~20μl 殘留的液體。

③  加入200μl 1× PBS，振蕩至細(xì)胞充分懸浮，洗滌細(xì)胞去除雜質(zhì)，13,000rpm離心10sec，wan全吸棄上清。

④  再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻，使細(xì)胞che底懸浮。

⑤  加入20μl蛋白酶K溶液，充分混勻。

3. （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫 放置5~10min。

4.  加入200 μl結(jié)合液 CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。

5. 冷卻后加100μl無水乙醇 (或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

6. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心1min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

7. 加入500μl抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 加入600μl漂洗液WB（請檢查是否已加入無水乙醇），13, 000rpm離心30sec，倒棄濾液。

9. 重復(fù)步驟 9 一遍。

10. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

11. 取出DNA吸附柱，放入一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量），室溫放置3~5min，13,000rpm離心1min。

12. DNA可以存放在2~ 8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。

相關(guān)產(chǎn)品：

50110-500 10000x GenGreen（同GelGreen）無毒核酸染料 藍(lán)光切膠儀用

50111-500 10000x GenRed（同GelRed）無毒核酸染料 凝膠成像儀用

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料） 延伸速度：6 kb/min

71517-05 2x KOD PCR MasterMix（含染料） 擴(kuò)增長度≤6kb 6 kb/min

組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he