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HG-CH001 CHO 殘留DNA檢測試劑盒

參考價 15500
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

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柏萊源(天津)生物科技有限公司主要從事分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)及免疫學(xué)實驗相關(guān)試劑及耗材的銷售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

我司代理品牌及優(yōu)勢品牌包含但不限于:sigma、Thermo Fisher、Goldbio、Qiagen、Abcam、ATCC、ECACC、Polysciences、艾本德、天根、Takara、B&D、BIOFLUX、biolegend等。

柏萊源(天津)生物科技有限公司具備良好的客戶服務(wù)意識和專業(yè)知識,致力于為科研人員提供系統(tǒng)的售前售后服務(wù)。我們以“秉承科研初心,促進產(chǎn)業(yè)新興”為經(jīng)營理念,專注于為廣大科研工作者提高技術(shù)成果的轉(zhuǎn)化和研發(fā)水平,不斷提升科研效率。我們有足夠的信心去迎接挑戰(zhàn),我們一定會用專業(yè)的產(chǎn)品知識和完善的售后服務(wù)來證明,未來是屬于我們的!

 

 

 

 

分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)及免疫學(xué)實驗相關(guān)試劑及耗材的銷售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100 Reactions
應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

    CHO殘留DNA檢測試劑盒說明書

:HG-CH001

CHO 殘留DNA檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介:

CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 CHO 宿主細胞, DNA 殘留量的專用試劑盒。本試劑盒利用TaqMan 熒光探針原理,定量檢測樣本中 CHO 殘留 DNA。檢測快速,專一性強,性能可靠,最-低檢測限可以達到fg水平。
試劑盒配套的 CHO DNA 定量參考品,已溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品。
檢測范圍:3 fg/μL ~ 3×105 fg/μL

規(guī)格:

100 Reactions

試劑盒組成:

組分規(guī)格存儲條件
CHO DNA定量參考品(30ng/μL)50μL×1管-20℃
CHO Primer&Probe Mix550μL×1管
2x qPCR Reaction Buffer1.6mL×1管
DNA稀釋液1.5m×3管
存儲條件見上表,有效期12個月。開封后未使用完的試劑盒注意仍在規(guī)定儲存條件下保存。










適用機型(包括但不限于):

◆ ABI PRISM 7500
◆ FQD-96A(博日)
◆ CFX96(Bio-Rad)
◆ Roche Light Cycler 480

需要準(zhǔn)備的耗材與設(shè)備:

實驗前請準(zhǔn)備好下列耗材與設(shè)備:
◆1.5mL或2mL無菌低吸附離心管
◆ 與PCR儀適配的96孔qPCR板或八聯(lián)排管
◆ 1000μL,200μL,10μL無菌低吸附帶濾芯槍頭
◆ 熒光定量PCR儀
◆ 水浴鍋/金屬浴

◆ 離心機
◆ 震蕩器
◆ 各規(guī)格移液器(如1000μL,200μL,10μL,2.5μL等)
◆ 磁力架

實驗步驟:

一、 樣品前處理

詳見樣品前處理試劑盒(貨號為HG-CL100)操作說明書。

二、 qPCR操作步驟

1. 定量參考品及NCS、NTC的制備
1.1 定量參考品:取出 CHO DNA 定量參考品、DNA 稀釋液置于冰上融化;待完-全融化后,輕微振蕩混勻,瞬時離心;

1.2 取 7 支干凈的 1.5mL 離心管,分別標(biāo)記為 ST0,ST1,ST2,ST3,ST4,ST5,ST6;

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過程如下表:

標(biāo)準(zhǔn)品代號稀釋體積濃度(fg/μL)
ST010μL CHO DNA定量參考品+90μL DNA稀釋液3×10?
ST110μL STO+90μL DNA稀釋液3×10?
ST210μL ST1+90μL DNA稀釋液3×10?
ST310μL ST2+90μL DNA稀釋液3×103
ST410μL ST3+90μL DNA稀釋液3×102
ST510μL ST4+90μL DNA稀釋液3×101
ST610μL ST5+90μL DNA稀釋液3×100








2. q-PCR 反應(yīng)液的制備和加樣
2.1 根據(jù)所需檢測的標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品數(shù)量(一般做3個復(fù)孔),計算所需孔數(shù):
      反應(yīng)孔數(shù) =(6 個濃度梯度的標(biāo)曲 +2 個陰性對照 NTC 和 NCS + 待測樣品)×3
2.2 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次所需的 qPCR Mix 總量:
      qPCR Mix =(反應(yīng)孔數(shù) +2 或 3)× 20μL(2 或 3 為操作損失量)
2.3 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按表 2 所示配制制 qPCR Mix。

組分單孔反應(yīng)(μL)
2× qPCR buffer15
CHO Primer&Probe Mix5
總體積20






qPCR Mix 配制表

3. 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示加樣(總體積30μL):

參考品20μL qPCR Mix +10μL ST1/2/3/4/5/6
陰性對照20μL qPCR Mix +10μL NTC/NCS
待測樣品20μL qPCR Mix +10μL 待測樣本

各反應(yīng)孔加樣示例

4.實驗需使用qPCR實驗專用的八聯(lián)管或者96孔板進行反應(yīng),需去除反應(yīng)體系中的氣泡,并離心將液體離至管底準(zhǔn)備反應(yīng)。
5.反應(yīng)孔排版示例


123456789101112
AST1ST1ST1





S1S1S1
BST2ST2ST2





S2S2S2
CST3ST3ST3





S3S3S3
DST4ST4ST4








EST5ST5ST5








FST6ST6ST6





ERC -S1ERC -S1ERC -S1
G



NTCNTCNTC

ERC -S2ERC -S2ERC -S2
H



NCSNCSNCS

ERC -S3ERC -S3ERC -S3








96孔板排版示例

三、 qPCR反應(yīng)程序和參數(shù)設(shè)置

(以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例。)

1.創(chuàng)建實驗反應(yīng)程序,設(shè)置兩步法反應(yīng)程序如下表:

Stage1污染消化Reps:150℃2min
Stage2預(yù)變性Reps:195℃20s
Stage3循環(huán)反應(yīng)Reps:4095℃3s
60℃30s




2.創(chuàng)建實驗反應(yīng)板,點擊 Select Fluorophores 選擇熒光 FAM;在反應(yīng)板圖表中,選擇樣品孔,在 Sample Type 中下拉選擇Unknow,勾選熒光 FAM,Target Name 命名為 CHO-DNA;輸入每個樣品的重復(fù)次數(shù)及 Sample Name。( 備注:如儀器要求設(shè)置猝滅基團與參比熒光:猝滅基團為 None,參比熒光為 ROX。)

3.在反應(yīng)板圖表中,選擇標(biāo)曲孔,在 Sample Type 中下拉選擇 Standard,勾選熒光 FAM,Target Name 命名為 CHODNA;輸入每個稀釋梯度的重復(fù)次數(shù)及 Sample Name。分別在 ST1、ST2、ST3、ST4、ST5、ST6 的 Concentration 一欄賦值為3.00E+05、3.00E+04、3.00E+03、3.00E+02、3.00E+01、3.00E+00(單位為 fg/μL)。

4.點擊Run界面“Start Run”按鈕進行PCR測定。

四、 qPCR結(jié)果分析

以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例
1. 點擊資料分析視窗Quantitation,可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、擴增效率(Effect)、R2。
2. 在視窗Quantitation Data 中,SQ Mean 一欄可讀取無模板對照NTC、NCS、待測樣本的檢測值,單位為fg/μL。
3. 數(shù)據(jù)可靠性評估:
• 三個平行孔間Ct值差應(yīng)小于1.0,Ct值大于35的孔除外;
• 陰性對照 NTC 和 NCS 的 CT 值都應(yīng)大于標(biāo)曲最-低濃度的 CT 值或根據(jù)實驗室自身驗證結(jié)果設(shè)定標(biāo)準(zhǔn);

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.98,擴增效率85%~110%之間;
• ERC 回收率在 50%~150% 之間(加標(biāo)回收率 =ERC/(0.9* 樣品 +0.1*ST3)。

注意事項:

1. 本試劑盒已通過穩(wěn)定性(凍融等因素)的驗證,無需分裝。

2. 陰性樣品和陽性樣品(參考品和待測樣品等)的配制環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,不可在一個區(qū)域內(nèi)操作,配制人員需穿戴整齊,戴好口罩、手套和穿好潔凈服。

3. 注意在不同加樣步驟間及時更換吸頭,避免交叉污染,避免長時開蓋。

4. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。

5. 試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用。

6. 只有嚴格遵守說明書的操作方法,全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測效果。

7. 盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化后立即進行后續(xù)qPCR檢測,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

8. 最終的試驗結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗環(huán)境密切相關(guān)。

9. 公司只對試劑盒本身負責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

10. 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。


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柏萊源(天津)生物科技有限公司的優(yōu)勢:

現(xiàn)貨供應(yīng):公司庫存充足,可快速發(fā)貨,減少用戶等待時間。

效期保障:嚴格把控產(chǎn)品質(zhì)量,確保試劑效期新鮮,保障實驗結(jié)果的可靠性。

專業(yè)技術(shù)支持:提供詳細的實驗方案和技術(shù)指導(dǎo),幫助用戶優(yōu)化實驗條件,提高實驗成功率。

定制化服務(wù):根據(jù)用戶需求,提供個性化的產(chǎn)品和服務(wù)解決方案。

售后保障:完善的售后服務(wù)體系,及時解決用戶在使用過程中遇到的問題。

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