IPEC-J2 豬小腸上皮細(xì)胞永生化

細(xì)胞鑒定： 免疫熒光鑒定已通過(guò)

細(xì)胞來(lái)源： 國(guó)內(nèi)建系

細(xì)胞背景 ：小腸黏膜，小腸的管壁分為黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜四層。小腸黏膜是最靠近管腔的 一層。由上皮、固有層和黏膜肌層組成。上皮和固有層向腸腔突起形成腸絨毛，上皮向固有 層凹陷形成小腸腺。小腸黏膜的上皮為單層柱狀上皮，由吸收細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和少量?jī)?nèi)分泌 細(xì)胞組成。小腸腺除上述細(xì)胞外，還有潘氏細(xì)胞和干細(xì)胞。吸收細(xì)胞主要功能是消化吸收， 此外也參與分泌性免疫球蛋白 A 的釋放。杯狀細(xì)胞分泌黏液，有滑和保護(hù)作用。潘氏細(xì)胞 分泌防御素、溶菌酶，對(duì)腸道微生物有殺滅作用。內(nèi)分泌細(xì)胞種類多，所分泌的激素參與調(diào) 控胃腸活動(dòng)。干細(xì)胞增殖、分化，補(bǔ)充脫落的上皮細(xì)胞。固有層的結(jié)締組織含有大量小腸腺， 以及豐富的淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞。黏膜肌層由內(nèi)環(huán)形和 外縱行兩薄層平滑肌組成。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶 SV40 基因

l細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

用途：僅供科研使用。

 培養(yǎng)條件 1）準(zhǔn)備上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

注意事項(xiàng) 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（

w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（

T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），

置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下

觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml

含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)

基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶 1：2 傳代 。

 運(yùn)輸形式 低溫：1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80 度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)

干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫: T25 瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

生物安全 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，

所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液

氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹

掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

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