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原位雜交檢測

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熒光原位雜交FISH

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 上海博谷生物科技有限公司是由歸國留學(xué)人員創(chuàng)辦的生物科技公司,創(chuàng)立于本世紀(jì)初,至今已有十余年的歷史,研發(fā)總部設(shè)在美國Research Park,University of California Davis。公司集技術(shù)服務(wù)、產(chǎn)品開發(fā)、項目合作和試劑耗材開發(fā)和銷售于一體。

主要從事生物、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等生命科學(xué)領(lǐng)域的分子生物學(xué)、免疫學(xué)等科研項目的技術(shù)服務(wù)、實驗委托與設(shè)計、技術(shù)咨詢等,公司自主研發(fā)的多種ELISA試劑盒享有較高的聲譽,細(xì)胞庫近千種細(xì)胞株為客戶提供服務(wù);為客戶代理銷售R&D、Sigma、Amresco 、Omega、Gibco、Pharmacia、HyClone、GIBCO等多個歐美知名品牌公司試劑。

科研試劑耗材,分子病理檢測服務(wù)

FISH實驗方法及步驟

一.探針變性

將探針在75oC恒溫水浴中溫育5min,立即置0oC,5~10min,使雙鏈DNA探針變性。

二.標(biāo)本變性

①將制備好的5-8um的玻片標(biāo)本于50oC培養(yǎng)箱中烤片2~3h。(經(jīng)Giemsa染色的標(biāo)本需預(yù)先在固定液中退色后再烤片)。

②取出玻片標(biāo)本,將其浸在70~75oC的體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2~3min。

③立即按順序?qū)?biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)70%、體積分?jǐn)?shù)90%和體積分?jǐn)?shù)100%冰乙醇系列脫水,每次5min,然后空氣干燥。

三.雜交

將已變性或預(yù)退火的DNA探針10μL 滴于已變性并脫水的玻片標(biāo)本上,蓋上18×18蓋玻片,用Parafilm封片,置于潮濕暗盒中37oC雜交過夜(約15~17h)。由于雜交液較少,而且雜交溫度較高,持續(xù)時間又長,因此為了保持標(biāo)本的濕潤狀態(tài),此過程在濕盒中進(jìn)行。

四.洗脫

此步驟有助于除去非特異性結(jié)合的探針,從而降低本底。

(1) 雜交次日,將標(biāo)本從37oC溫箱中取出,用刀片輕輕將蓋玻片揭掉。

(2) 將已雜交的玻片標(biāo)本放置于已預(yù)熱42~50oC的體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次,每次5min。

(3) 在已預(yù)熱42~50oC的1×SSC中洗滌3次,每次5min。

(4) 在室溫下,將玻片標(biāo)本于2×SSC中輕洗一下。

(5) 取出玻片,自然干燥。

(6) 取200μL復(fù)染溶液(PI/antifade或DAPI/antifade染液)滴加在玻片標(biāo)本上,蓋上蓋玻片。

五.熒光顯微鏡觀察FISH結(jié)果


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