大鼠細胞間粘附分子1試劑盒
大鼠細胞間粘附分子1試劑盒主要有 ELISA 試劑盒和化學發(fā)光免疫分析試劑盒等類型,以下以 ELISA 試劑盒為例介紹:
通常采用雙抗體夾心法。將純化的大鼠抗細胞間粘附分子 1 抗體包被于微孔板,制成固相抗體,加入含細胞間粘附分子 1 的樣品,再與 HRP 標記的 ICAM-1 抗體結(jié)合,形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物,經(jīng)洗滌后加底物 TMB 顯色,TMB 在 HRP 酶催化下轉(zhuǎn)化成藍色,在酸作用下轉(zhuǎn)化為黃色,顏色深淺和樣品中的細胞間粘附分子 1 呈正相關(guān),用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度,通過標準曲線計算樣品中 ICAM-1 含量。
血清、血漿、細胞上清液、腦脊液、腹腔液等。
以慧嘉生物的試劑盒為例:
進行標準品的稀釋與加樣,設(shè)置不同濃度梯度。
加樣,分別設(shè)空白孔、待測樣品孔,加樣至酶標板孔底部并輕輕混勻。
用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
再次 37℃溫育。
重復洗滌步驟。
每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘。
每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)。
以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)。
標本中待測物質(zhì)含量過高時,需先稀釋后再測定,計算時乘以總稀釋倍數(shù)。
封板膜只限一次性使用。
底物請避光保存,嚴格按說明書操作,試驗結(jié)果以酶標儀讀數(shù)為準。