測(cè)序級(jí)重組胰蛋白酶MTrypsin

◆概述

胰蛋白酶(Trypsin; EC 3.4.21.4)是一種絲氨酸蛋白酶，酶解賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵。重組豬胰蛋白酶是由重組畢赤酵母表達(dá)并采用層析色譜法純化獲得，氨基酸序列與豬胰腺來源的陽離子型胰蛋白酶*一致。未經(jīng)修飾的胰蛋白酶自切降解肽段，可能對(duì)蛋白質(zhì)測(cè)序及液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)量肽圖檢測(cè)造成干擾，自切降解會(huì)造成消化樣品過程中酶活性降低，且被證明可能產(chǎn)生胰糜蛋白酶活性。本品為重組表達(dá)胰蛋白酶，多步純化無雜酶活性；經(jīng)還原甲基化修飾，在蛋白組學(xué)及質(zhì)量肽圖研究中，對(duì)單獨(dú)酶切或與Lys-C分步/混合酶切時(shí)，對(duì)蛋白酶水解具有抵抗力，從而保證其活性高穩(wěn)定性好?；钚允芙z氨酸蛋白酶抑制劑如TLCK、PMSF等的抑制，金屬離子螯合劑如EDTA等抑制酶活。

◆特點(diǎn)

●  優(yōu)良的穩(wěn)定性：0.1 mg/mL測(cè)序級(jí)胰蛋白酶MTP，于50 mmol NH₄HCO₃酶切緩沖中37℃水浴反應(yīng)過夜（15 h），酶活保留超過90%。

●  良好的特異性：利用測(cè)序級(jí)胰蛋白酶MTP，1:50(w/w)酶切人胰島素B鏈，RP-HPLC于214 nm波長(zhǎng)檢測(cè)酶切產(chǎn)物，酶切16 h產(chǎn)物與2 h產(chǎn)物相比，產(chǎn)物肽峰比例增加而個(gè)數(shù)為2個(gè)且不隨時(shí)間延長(zhǎng)增加。

◆特性

性狀    白色或類白色凍干粉

純度    ≥95%

相對(duì)分子量    23 kDa±2.3 kDa

酶比活性    ≥3800 USP/mg 

◆來源

由重組畢赤酵母表達(dá)并采用層析色譜法純化獲得，氨基酸序列與豬胰腺來源的陽離子型胰蛋白酶*一致。 

◆穩(wěn)定性

酶穩(wěn)定性對(duì)比研究

考察樣品均為RTP凍干粉或MTP凍干粉用10 mmol/L HCl或50 mmol/L NH₄HCO₃溶解的酶溶液（含量為0.1 mg/mL）。

◆使用方法

溶解緩沖：10 mmol/L HCl或CH₃COOH，20 mmol/L CaCl₂；溶解后分裝-15℃以下保存。

酶切緩沖：50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH₄HCO₃，1 mmol/L CaCl₂，pH 7.6~8.0；

推薦條件：50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH₄HCO₃，1 mmol/L CaCl₂酶切緩沖中，1:20~1:100比例與待消化蛋白(含量0.5~1.0 mg/mL)混合，30~37℃進(jìn)行酶切反應(yīng)；經(jīng)變性處理的蛋白，尿素或鹽酸胍建議稀

推薦條件：釋至1 mol/L以下。

◆應(yīng)用實(shí)例

MTP與RTP用于酶切質(zhì)量肽圖對(duì)比

◆保存條件

儲(chǔ)存穩(wěn)定性：凍干粉存于-15℃以下，24個(gè)月穩(wěn)定；HCl或CH₃COOH溶解后，分裝凍存于-15℃以下。

運(yùn)輸穩(wěn)定性：冰袋保溫運(yùn)輸，活性穩(wěn)定。

◆產(chǎn)品列表